常用的病毒基因傳遞載體包括逆轉(zhuǎn)錄病毒（RV）、腺病毒（AdV）、腺相關(guān)病毒（AAV）、慢病毒（LV）和單純皰疹病毒（HSV）。其中，AAV屬于細(xì)小病毒科，是其中最小的單鏈和無(wú)囊膜DNA病毒，目前已發(fā)現(xiàn)的血清型有11種。在所有不同血清型的AAV中，重組AAV-2是最常用的一種，它可以通過(guò)輔助病毒或Cell Biolabs提供的AAV Helper-Free System來(lái)體外生產(chǎn)出高滴度的重組病毒。AAV-2可以感染分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞，并能在人類(lèi)宿主細(xì)胞中維持，具有一定的基因穩(wěn)轉(zhuǎn)潛力。由于AAV-2是一種天然缺陷型病毒，需要在反式結(jié)構(gòu)中提供若干因子才能進(jìn)行生產(chǎn)性感染，因此被公認(rèn)為最安全的病毒載體。近年來(lái)，利用DNA重組技術(shù)開(kāi)發(fā)了一種新型的載體AAV-DJ，是從8種不同血清型AAV重組而來(lái)的一個(gè)混合衣殼，使其能在各種不同細(xì)胞和組織中都具有顯著較高體外感染效率的載體。重組的AAV-2和AAV-DJ病毒都可通過(guò)CsCl梯度超離法、碘二醇密度梯度超離法或Cell Biolabs的AAV純化試劑盒來(lái)純化。

   利用病毒載體來(lái)轉(zhuǎn)導(dǎo)基因必須要準(zhǔn)確地測(cè)量病毒滴度。傳統(tǒng)檢測(cè)AAV滴度是通過(guò)DNA斑點(diǎn)雜交或類(lèi)似方法來(lái)定量AAV基因組拷貝數(shù)（GC）。然而這些方法耗時(shí)耗力，且穩(wěn)定性不佳。對(duì)于已經(jīng)高度純化的病毒樣品，也通常用其在260nm的吸光度來(lái)估算病毒粒子總數(shù)，但這種方法不適用于未純化的病毒上清，因?yàn)槠渲械碾s質(zhì)成分會(huì)影響260nm的光吸收度。

   西美杰代理的Cell Biolabs提供了一種快速全面的用于檢測(cè)純化后的AAV滴度的試劑盒QuickTiter? AAV Titer ELISA Kit。該試劑盒包含一個(gè)96孔板和足夠檢測(cè)96個(gè)樣本的試劑，包括已滅活的AAV標(biāo)準(zhǔn)品，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線能夠計(jì)算出樣品中純化后的AAV滴度。該試劑盒檢測(cè)靈敏度為6.25×108 GC/mL，能夠檢測(cè)AAV-1，AAV-2，AAV-3，AAV-5，AAV-6，AAV-8，AAV-9，AAV-10，AAV-DJ和AAV-DJ/8多種血清型的AAV滴度，并且適用于所有表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)的AAV。

檢測(cè)原理

   AAV衣殼是由VP1、VP2和VP3三種蛋白質(zhì)混合構(gòu)成，平均每一個(gè)病毒粒子中包含60個(gè)VP分子，其比例為5 VP1 : 5 VP2 : 50 VP3。試劑盒中提供的96孔板已預(yù)包被了可以結(jié)合三種VP蛋白的捕獲抗體，當(dāng)AAV樣品或標(biāo)準(zhǔn)品加入到96孔板中，其AAV衣殼蛋白就會(huì)與捕獲抗體結(jié)合。經(jīng)過(guò)孵育和洗板等步驟后，再分別加入AAV VP衣殼抗體和HRP標(biāo)記的二抗，而未結(jié)合的抗體將被洗脫下來(lái)。經(jīng)底物顯色后，測(cè)定450nm處的吸光度，最后通過(guò)AAV標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算未知樣品中AAV衣殼蛋白濃度，進(jìn)而計(jì)算出樣本中AAV滴度。

下圖展示了AAV滴度檢測(cè)試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果。

產(chǎn)品特點(diǎn)

• 通過(guò)檢測(cè)純化后的重組AAV衣殼蛋白來(lái)確定AAV滴度；
• AAV定量結(jié)果由標(biāo)準(zhǔn)酶標(biāo)儀讀?。?/span>
• 試劑盒中提供滅活的AAV標(biāo)準(zhǔn)品；
• 適用于多種血清型AAV滴度測(cè)定，包括AAV-1, AAV-2, AAV-3, AAV-5, AAV-6, AAV-8, AAV-9, AAV-10, AAV-DJ and AAV-DJ/8

產(chǎn)品信息

Cell Biolabs公司坐落于美國(guó)加利福尼亞州圣地亞哥市，一直致力于開(kāi)發(fā)生命科學(xué)研究領(lǐng)域的技術(shù)和工具，并將所開(kāi)發(fā)的創(chuàng)新性技術(shù)成果商業(yè)化。Cell Biolabs孜孜不倦的完善產(chǎn)品，以期使細(xì)胞功能和疾病機(jī)制研究達(dá)到新高度。Cell Biolabs公司的產(chǎn)品獨(dú)具特色并且處于行業(yè)前沿水平，全球眾多大學(xué)、政府研究機(jī)構(gòu)、生物、制藥企業(yè)的科研實(shí)驗(yàn)室均在使用。北京西美杰科技有限公司是Cell Biolabs中國(guó)一級(jí)代理，為用戶提供完善的技術(shù)支持與售后服務(wù)。如您對(duì)上述產(chǎn)品感興趣，歡迎撥打西美杰客服熱線400-050-4006或登錄網(wǎng)站m.vipukk.cn了解更多信息。

引用文獻(xiàn)

1. Rabinowitz, J, and Samulski, R. J. (1998) Curr. Opin. Biotechnol., 9, 470-475.

2. Summerford, C., and Samulski, R. J. (1999) Nat. Med., 5, 587-588.

3. Clark, K., Liu, X., McGrath, J., and Johnson, P. (1999) Hum. Gene Ther., 10, 1031-1039.

4. Sonntag, F., Schmidt, K., and Kleinschmidt, J.A. (2010) Proc Natl Acad Sci U S A., 107, 10220-5.